单标信号放大试剂盒Plus版 (TYR690/兔二抗)

一、产品概述 

本产品为基于酪酰胺信号放大（TSA, Tyramide Signal Amplification）技术开发的 Plus 版单标免疫荧光检测试剂盒，采用 200× 浓缩型 TYR-690 远红色荧光染料，搭配专属 TSA 反应缓冲液与 HRP 山羊抗兔二抗，通过辣根过氧化物酶（HRP）介导的酶促共价沉积反应，可实现靶蛋白检测信号 10-100 倍增强。 试剂盒适用于石蜡切片、冰冻组织切片及细胞爬片的单标免疫荧光高灵敏检测，同时支持通过热修复洗脱循环开展双标、三标及更高重数的多重免疫荧光（mIHC）实验。兔二抗体系适配全部使用兔源一抗的实验方案，突破传统多重染色中一抗种属匹配限制，无需顾虑抗体交叉反应，大幅简化实验设计。全套试剂即用型配齐，无需自行搭配，广泛应用于肿瘤病理、组织微环境分析、低丰度蛋白原位检测等科研场景。

二、检测原理 

酪酰胺信号放大（TSA）技术是一类利用辣根过氧化物酶（HRP）对靶蛋白进行标记的酶学检测方法，原理与常规免疫组化 DAB 显色体系同源。实验过程中，HRP 标记的二抗与结合在靶抗原上的一抗特异性结合，加入酪胺荧光素底物后，HRP 在过氧化氢存在下催化底物活化，生成高活性荧光自由基；活化的荧光基团可与抗原周边蛋白的酪氨酸、色氨酸、组氨酸等残基发生共价结合，在靶标位点大量沉积，从而实现检测信号 10-100 倍的显著增强。 完成单轮靶标染色后，通过热修复法（微波、煮沸或水浴）或抗体洗脱液洗除未共价结合的一抗 - 二抗 - HRP 复合物，共价锚定在组织蛋白上的荧光信号稳定保留；随后更换下一靶标一抗与对应光谱酪胺荧光底物，重复孵育与显色流程，即可实现多靶标连续标记。 由于每轮反应体系中仅存在单一抗体，因此不存在抗体交叉反应，也无需考虑一抗与二抗的种属匹配限制。同一张切片上的所有靶标均可选用高特异性兔单克隆抗体，搭配同一支 HRP 抗兔二抗即可完成全部实验。本系列试剂盒涵盖 TYR-480、TYR-520、TYR-570、TYR-620、TYR-690、TYR-780 等多种光谱酪胺荧光染料，各染料可单独使用或自由组合，实现单标、双标、三标乃至更多重荧光放大与多重同源抗体荧光标记。

三、产品应用

1. 低丰度靶蛋白高灵敏免疫荧光检测，解决常规荧光染色中弱表达蛋白信号弱、背景高、检出率低的问题

2. 石蜡切片、冰冻组织切片单标及多重免疫荧光（mIHC）染色

3. 兔源一抗多轮循环多重标记实验，用于肿瘤微环境、免疫细胞亚群、细胞空间分布图谱分析

4. 临床人病理组织、小鼠及大鼠等动物组织多标志物原位表达与共定位分析

5. 肿瘤免疫学、神经科学、发育生物学、炎症与纤维化疾病等方向的病理机制研究

6. 类器官切片、细胞爬片多靶标荧光标记与药物筛选评估

四、产品特点

1. 浓缩型 Plus 染料，性价比优异：TYR-690Plus 为 200× 浓缩型远红色荧光染料，可根据实验需求灵活调整稀释比例，适配不同抗原表达强度样本，有效降低实验成本

2. 专属 TSA 缓冲液，结果稳定可靠：配套专用 TSA buffer，优化反应体系 pH 值与离子强度，保障 HRP 酶促反应效率，批次间重复性好

3. 兔二抗体系，同源抗体优选：HRP 山羊抗兔二抗适配全部兔源一抗实验方案，多重染色时所有靶标均可选用高特异性兔单抗，无种属匹配困扰

4. 信号放大倍数高，检测灵敏度强：酶促沉积反应实现 10-100 倍信号增强，可清晰检出常规荧光方法难以识别的低丰度靶蛋白

5. 远红色通道，光谱干扰小：TYR-690 发射光谱处于远红光区域，可有效降低组织自发荧光干扰，多色组合时与其他通道串色更少

6. 荧光共价结合，信号稳定耐洗脱：酪胺荧光分子与组织蛋白共价结合，耐高温洗脱与多轮循环，多重染色过程中信号不丢失、不串色，抗淬灭能力强

7. 全套试剂配齐，开箱即用：包含浓缩荧光染料、TSA 缓冲液、HRP 抗兔二抗、DAPI 复染液、抗体稀释液、3% 过氧化氢、干固型抗荧光淬灭封片剂，无需额外采购

8. 干固型封片剂，保存效果更佳：配套干固型抗荧光淬灭封片剂，封片后切片无流动、不易脏污，长期保存荧光不易淬灭

9. 多色拓展性强：可与 TYR 系列其他 Plus 荧光染料自由搭配，轻松实现 2-6 重及以上多重免疫荧光染色

五、试剂盒组分

六、染料使用说明 

TSA 荧光染料反应液由 TYR-690Plus 荧光染料与 TSA buffer 现配现用。 标准推荐比例：TYR-690Plus : TSA buffer = 1 : 200，该比例在大多数实验条件下可获得最佳信噪比 优化调整范围：推荐稀释比例区间为 1:50 ~ 1:400，可根据样本抗原丰度、一抗孵育条件灵活调整 一抗常温孵育 1h-3h：建议稀释比例 1:50 ~ 1:200 一抗 4℃过夜孵育（12h 及以上）：建议稀释比例 1:200 ~ 1:400 或更高

七、简要实验流程 

详细操作步骤请参见配套技术文档《多重免疫荧光实验流程》

1. 样本前处理：石蜡切片脱蜡水化或冰冻切片复温，进行抗原修复

2. 内源酶封闭：3% 过氧化氢孵育，封闭组织内源性过氧化物酶

3. 封闭与一抗孵育：抗体稀释液封闭非特异性位点，加入靶标一抗孵育

4. 二抗孵育：滴加 HRP 山羊抗兔二抗，室温孵育

5. TSA 荧光显色：按比例配制 TYR-690Plus 工作液，滴加样本进行显色反应

6. 多重染色循环：热修复洗脱非共价抗体复合物，更换下一靶标兔一抗与对应荧光底物，重复上述步骤

7. 核染色与封片：DAPI 染核，干固型抗荧光淬灭封片剂封片，荧光显微镜或共聚焦显微镜成像

八、产品成像示例 

（A）人输卵管组织：指标 A（570 黄）＋指标 B（520 绿）＋指标 C（690 粉） 

（B）小鼠肾组织：指标 A（570 黄）＋指标 B（520 绿）＋指标 C（690 粉）

（C）人胃癌肿瘤组织：指标 A（690 粉）＋指标 B（620 红）＋指标 C（570 黄）＋指标 D（520 绿） 

（D）人肠组织：指标 A（570 黄）＋指标 B（520 绿）＋指标 C（690 粉）＋指标 D（620 红）＋指标 E（480 青）