JFKR-TIL系列 是一种专为 肿瘤浸润淋巴细胞（Tumor-Infiltrating Lymphocytes, TILs） 体外扩增优化的 无血清培养基，提供 100mL（JFKR-TIL-100） 和 500mL（JFKR-TIL-500） 两种规格。本产品采用 化学成分明确的无血清配方，避免动物源成分带来的批次差异和污染风险，可高效支持TIL细胞的快速扩增，同时维持其 高细胞活性、肿瘤杀伤能力及表型稳定性，适用于 临床研究及细胞治疗产品开发。
产品概述
JFKR-TIL系列是一种专为肿瘤浸润淋巴细胞体外扩增优化的无血清培养基，提供100mL（JFKR-TIL-100）和500mL（JFKR-TIL-500）两种规格。本产品采用化学成分明确的无血清配方，避免动物源成分带来的批次差异和污染风险，可高效支持TIL细胞的快速扩增，同时维持其高细胞活性、肿瘤杀伤能力及表型稳定性，适用于临床研究及细胞治疗产品开发。
产品应用
肿瘤免疫治疗研究
TIL细胞体外扩增（用于过继性细胞治疗）
肿瘤微环境中T细胞功能研究
联合免疫检查点抑制剂（如PD-1/CTLA-4抗体）的协同效应评估
TIL细胞治疗产品开发
符合GMP-like要求的TIL扩增工艺优化
提高TIL细胞产量（可达1000倍扩增）
保持TIL的高肿瘤抗原特异性和持久性
免疫机制研究
T细胞耗竭与记忆表型调控
细胞代谢（如糖酵解/氧化磷酸化）对TIL功能的影响
TCR多样性及克隆演变分析
产品特点
无血清和化学成分明确
不含FBS（胎牛血清）或人血清，降低批次差异和污染风险
避免血清带来的免疫原性干扰，提高实验可重复性
优化的细胞因子组合
含IL-2（3000 IU/mL）和IL-15（10 ng/mL），促进TIL扩增并维持记忆表型
可选配IL-21（增强T细胞持久性）或4-1BB激动剂（提高活化信号）
高扩增效率和细胞活力
7-14天扩增可达100-1000倍（取决于初始TIL质量）
细胞存活率大于90%（经流式Annexin V/PI检测）
维持CD3+CD8+效应T细胞优势群体
兼容临床级培养体系
适用于静态培养（T25/T75培养瓶）和动态培养（G-Rex/WAVE生物反应器）
低内毒素（小于1 EU/mL），符合细胞治疗产品开发标准
产品优势
高扩增效率：相比传统含血清培养基，TIL细胞增殖更快，且不易发生耗竭
稳定表型：维持CD8+效应T细胞和记忆T细胞（CD62L+CD45RO+）比例
低批次差异：化学成分明确，确保实验可重复性
临床转化友好：无动物源成分，符合细胞治疗产品的监管要求
即用型和灵活适配：可直接使用，也可根据实验需求补充特定细胞因子（如IL-7/IL-21）
总结
JFKR-TIL无血清扩增培养基为TIL细胞治疗研究提供了高效、稳定且符合临床转化要求的培养体系，适用于实验室研究、临床前开发及GMP生产。其优化的细胞因子组合和无血清配方，可显著提高TIL细胞的扩增效率、存活率及抗肿瘤活性，助力肿瘤免疫治疗的科研与转化应用。
试剂盒产品信息
产品组成 | 规格 | 储存条件及周期 | |
1 | TIL细胞扩增培养基A | 100 mL | 4 ℃， 3 months或者 -20 ℃，1 year |
2 | TIL细胞激活培养基B | 30 mL | 4/-20 ℃，2 year |
3 | 组织消化液C | 50 mL | 4/-20 ℃，1 year |
4 | 分离液D | 20 mL | 常温 |
5 | 分离液E | 40 mL | 常温 |
6 | 细胞滤筛 | 100μm | 常温 |
7 | 组织缓冲液 F | 2x250 mL | 4/-20 ℃，2 year |
8 | 组织保存液G | 5X8ml | 4/-20 ℃，1 year |
9 | 冻存液H | 30ml | 4/-20 ℃，1 year |
试剂到货处理
1. TIL细胞扩增培养基A 、TIL细胞激活培养基B在4 ℃可保存3个月，收到货后4 ℃保存，建议1个月内使用完毕，长期不用建议放于-20 ℃储存，避免反复冻融超过2次。
2.组织保存液G、组织消化液C内含有维持细胞活性营养成分，为了保持试剂营养成分的活性，长期不用建议放于-20 ℃储存，避免反复冻融超过2次。
操作步骤与方法
1 组织前处理
1.1 实验材料
需提前准备缓冲液F（4 ℃预冷）、组织保存液G、取样管、组织运输箱、冰袋。
1.2 组织的获取与运输
组织的取样与运输是TIL提取成功的第一个环节也是最容易忽视的环节，若组织前期保存不当会导致细胞活性差、污染、正常细胞少等问题，降低TIL提取成功率。
组织应在离体的30 min内放入组织保存液G，缓冲液F清洗3-5次，将组织表面血液冲洗干净，放入组织保存液G中，取样管于4 ℃低温保存运输（72 h内）。
2 TIL细胞培养（以24孔板为例）
2.1 实验材料
需提前准备缓冲液F（4 ℃）、组织消化液C（37 ℃）、分离液 D、分离液E、TIL扩增培养基A、TIL激活培养基B（室温或37 ℃）、镊子（10㎝）、尖头眼科手术剪/手术刀片、一次性60 mm培养皿、1.5 mL/15 mL/50 mL离心管、100㎛细胞滤网、3 mL巴氏吸管/1000 μL移液枪、24孔细胞培养板、金属冰盒。
2.2 TIL细胞提取
2.2.1 组织的处理
取材后的组织建议在 2 – 8 ℃条件下保存运输，快速转运至洁净实验室进行TIL提取实验流程，组织拍照并登记详细信息。
2.2.1.1 组织的清洗
取样管消毒后，在超净台中将组织取出来，放入培养皿中，加入缓冲液 F，用3 mL巴氏吸管或1000 μL移液枪吹打清洗，重复清洗操作三次及以上。
2.2.1.2 组织的解离与消化
用眼科剪或手术刀片去除组织杂质，镊子转移至1.5 mL EP管中，用眼科剪进一步将组织机械解离成体积约为 1~3 mm3的组织块，转移至15 mL EP管中，加入8 mL组织消化液37 ℃震荡消化60min。消化过程每20min显微镜下观察组织消化情况，取少量消化液在显微镜下观察，观察到较多的单个细胞后进行下一步操作。
2.2.1.3 组织的过滤
加入3倍体积的缓冲液F终止消化，消化完成组织通过100 μm孔径的细胞筛网过滤，收集滤液。
2.2.1.4 TIL细胞分离
按顺序依次添加TIL分离液D 2ml，分离液E 4ml于15ml离心管，再沿离心管壁轻轻加入组织滤液6ml，2000转离心20min，收集D分离液界面上的细胞，该层富含TIL 细胞的悬液，离心1500转10min。分离液E的界面层主要为肿瘤细胞。再用缓冲液F清洗TIL细胞洗2 次，以除去细胞分离液，得到TIL细胞沉淀。
可选择合适的TIL细胞量进行程序降温冻存。
3 TIL细胞激活扩增培养（以24孔板为例）
3.1 实验材料
需提前准备缓冲液F（4 ℃）、TIL扩增培养基A，TIL激活培养基B（室温或37 ℃）、15 mL/离心管、3ml巴氏吸管/1000 μL移液枪、24孔细胞培养板。
3.2 TIL细胞激活
将分离好的TIL细胞计数。
TIL细胞激活培养基B重悬TIL细胞（浓度200000 cell/ml），每孔添加1.5mlTIL细胞激活培养基B，连续激活48h。
3.2.1 TIL细胞扩增
激活后的TIL细胞，缓慢沿细胞板侧壁吸取TIL细胞激活培养基B（注意：不要吸取细胞）
每孔添加1.5mlTIL细胞扩增培养基A连续扩增培养。
在连续培养第4天（此时可观察到T细胞明显成团），缓慢沿细胞板侧壁吸取TIL细胞扩增培养基A，添加新鲜TIL细胞扩增培养基A，连续培养5天（此时可观察到大量T细胞明显成团悬浮于培养基内）。
可进行流式分选鉴定。
3.2.2 原代分离TIL细胞复苏
3.2.2.1 实验材料
缓冲液F、TIL细胞扩增培养基A、 TI细胞L扩增培养基B、孔细胞培养板、15mL离心管、水浴锅、3mL巴氏吸管/移液枪。
3.2.2.2 原代分离TIL细胞复苏
取15ml离心管，添加8ml缓冲液F待用
从低温环境中取出冻存的细胞，快速置于37 ℃水浴锅中融解，水浴融解过程中，需轻轻摇动冻存管，以确保冻存液在短时间内完全融解。将解冻后的T细胞快速转移至15 mL离心管，使用移液枪轻柔吹打6-8次，1000转离心5 min弃上清。将T细胞沉淀计数，添加合适的 TIL细胞激活培养基B混匀（浓度500000 cell/ml），每孔添加1.5ml混合液于24孔细胞培养板内观察培养48h。
激活后的TIL细胞，缓慢沿细胞板侧壁吸取TIL细胞激活培养基B（注意：不要吸取细胞）
每孔添加1.5mlTIL细胞扩增培养基A连续扩增培养。
在连续培养第4天（此时可观察到T细胞明显成团），缓慢沿细胞板侧壁吸取TIL细胞扩增培养基A，添加新鲜TIL细胞激扩增培养基A，连续培养5天（此时可观察到大量T细胞明显成团悬浮于培养基内）。
可进行流式分选鉴定
3.2.3 原代分离TIL细胞扩增培养
将悬浮于培养基内的T细胞团收集于15ml离心管，1000转离心5min，细胞计数（浓度为200000 cell/ml）。TIL细胞扩增培养基A重新接种24孔细胞培养板。根据接种密度不同48-72h可完成扩增。
4 T冻存（以24孔板为例）
4.1 实验材料
传代缓冲液F（4 ℃）、TIL冻存液H（4 ℃）、15 mL离心管、细胞冻存管、程序降温盒、移液枪。
4.2 TIL细胞冻存
将悬浮于培养基内的T细胞团收集于15ml离心管，1000转离心5min，细胞计数，添加TIL冻存液H（浓度为5000000 cell/ml），转移至细胞冻存管内，进行程序降温。
5 TIL细胞复苏培养（以24孔板为例）
5.1 实验材料
缓冲液F、 TIL细胞扩增培养基B、孔细胞培养板、15mL离心管、水浴锅、3mL巴氏吸管/移液枪。
5.2 TIL细胞复苏培养
取15ml离心管，添加8ml缓冲液F待用
从低温环境中取出冻存的细胞，快速置于37 ℃水浴锅中融解，水浴融解过程中，需轻轻摇动冻存管，以确保冻存液在短时间内完全融解。将解冻后的T细胞快速转移至15 mL离心管，使用移液枪轻柔吹打6-8次，1000转离心5 min弃上清。将T细胞沉淀计数，添加合适的 TIL细胞扩增培养基A混匀，每孔添加1.5nl混合液于24孔细胞培养板内观察培养。
运用范围:
FOR LABORATORY RESEARCH USE ONLY. NOT FOR USE IN DIAGNOSTIC PROCEDURES
