单标信号放大试剂盒(TYR570/兔二抗)

一、产品概述

TSA 酪酰胺信号放大多重免疫荧光染色 Plus 试剂盒，基于酪酰胺信号放大（TSA, Tyramide signal amplification）酶学标记技术开发，依托辣根过氧化物酶 HRP 催化酪胺底物发生共价结合反应，可将检测信号放大10‑100 倍。 试剂盒配备多种不同发射光谱的酪胺荧光染料（TYR‑480、TYR‑520、TYR‑570、TYR‑620、TYR‑690、TYR‑780），支持单标、双标、三标及更高重数的多重免疫荧光染色。利用热修复洗脱去除非共价结合的抗体复合物，保留共价锚定在组织样本上的荧光信号，规避传统多重荧光染色中一抗种属匹配、抗体交叉反应难题；同一张切片可全部使用兔源一抗，搭配通用 HRP 山羊抗兔二抗完成多靶标检测，适合低丰度抗原、石蜡 / 冰冻组织切片的高灵敏多重荧光成像。

二、工作原理

酪酰胺信号放大（TSA）技术是利用辣根过氧化酶（HRP）实现靶蛋白标记的酶学检测手段，原理与免疫组化 DAB 显色体系相近。HRP 标记二抗催化体系内酪胺荧光素底物，生成活化荧光底物，活化底物可与样本抗原上酪氨酸、色氨酸、组氨酸等氨基酸残基共价结合，使荧光分子稳定固定于样本。 完成一轮染色后，通过热修复、抗体洗脱方式洗除非共价结合的一抗‑二抗‑HRP 复合物，共价结合的荧光染料不受影响；再孵育下一组一抗与 HRP 二抗，更换另一光谱酪胺荧光底物，循环操作即可实现多重靶标标记。 HRP 介导的酶促反应可在抗原结合位点富集大量荧光分子，实现信号 10‑100 倍放大。整套实验每轮仅孵育单一靶标抗体，不存在抗体交叉干扰，解除多重染色对一抗种属来源的严格限制，全部靶标均可采用兔源一抗，仅需配套 HRP 山羊抗兔二抗开展实验。本试剂盒提供多色酪胺荧光染料，可单独或组合使用，实现单重至多重同源抗体荧光标记。

三、产品应用

1.石蜡切片、冰冻组织切片多重免疫荧光染色

2.低丰度抗原的高灵敏免疫荧光检测

3.同源一抗（多组兔源一抗）多重标记实验

4.肿瘤组织、动物脏器、人体临床病理组织多靶标共定位分析

5.免疫组化‑荧光联合检测、原位蛋白表达定位研究

四、产品特点

1.超高信号放大：酶促反应实现 10‑100 倍信号增强，可检出传统荧光染色难以观察的低表达抗原

2.突破种属限制：支持同一张切片全部使用兔源一抗，无需顾虑一抗种属冲突，简化抗体选型

3.多重染色能力：覆盖 TYR‑480/520/570/620/690/780 多光谱荧光底物，轻松完成 2‑5 重及以上多色标记

4.荧光信号稳定：酪胺染料与组织蛋白共价结合，荧光不易淬灭，切片保存稳定性佳

5.完整即用型体系：荧光染料、增强剂、二抗、DAPI 复染液、封片剂、抗体稀释液等全套组分，减少试剂搭配工作量

6.适配多样本类型：兼容人临床病理组织、小鼠、大鼠等多种动物组织石蜡切片与冰冻切片

五、试剂盒组分信息

六、简要实验流程

完整详细操作步骤，请查阅配套技术文档《多重免疫荧光实验流程》

1.组织切片脱蜡至水 / 冰冻切片复温修复

2.过氧化氢封闭内源性过氧化物酶

3.抗原修复，封闭非特异性位点

4.孵育一抗 → HRP 山羊抗兔二抗

5.TSA 荧光信号孵育显色

6.热修复洗脱，去除非共价结合抗体

7.循环孵育下一靶标一抗、二抗、对应 TSA 荧光底物，直至全部靶标标记完成

8.DAPI 细胞核复染

9.抗荧光淬灭封片剂封片，荧光显微镜成像观察

七、产品成像示例

（A）人输卵管组织：指标 A（570 黄）＋指标 B（520 绿）＋指标 C（690 粉） 

（B）小鼠肾组织：指标 A（570 黄）＋指标 B（520 绿）＋指标 C（690 粉） 

（C）人胃癌肿瘤组织：指标 A（690 粉）＋指标 B（620 红）＋指标 C（570 黄）＋指标 D（520 绿） 

（D）人肠组织：指标 A (570 黄)＋指标 B (520 绿) ＋指标 C (690 粉) ＋指标 D (620 红) ＋指标 E (480 青)