肺癌类器官培养基

产品概述

肺癌类器官培养基（JFKR-LC-100/JFKR-LC-500）是一种专为肺癌类器官（Lung Cancer Organoids）体外培养设计的高效培养基。该培养基经过优化，能够支持肺癌类器官的生长、增殖和功能维持，适用于肺癌生物学研究、药物筛选、个性化医疗以及肿瘤微环境研究等领域。

产品特点

高效支持生长：提供肺癌类器官生长所需的营养因子和信号分子，促进肿瘤细胞的增殖和类器官形成。
肿瘤特性维持：维持肺癌类器官的肿瘤特异性特征，如基因突变、药物敏感性和侵袭性。
无血清配方：减少外源性干扰，降低背景信号，适用于高灵敏度实验。
批次稳定性高：确保实验结果的可靠性和可重复性。
多种规格：提供100 mL（JFKR-LC-100）和500 mL（JFKR-LC-500）两种规格，满足不同实验需求。

适用范围

肺癌类器官培养：支持肺癌类器官的长期培养和扩增。
药物筛选：评估化疗药物、靶向药物和免疫治疗药物对肺癌类器官的疗效和毒性。
个性化医疗：利用患者来源的肺癌类器官进行个体化药物敏感性测试。
肿瘤生物学研究：研究肺癌的发病机制、肿瘤异质性和转移机制。
肿瘤微环境研究：模拟肿瘤微环境，研究肿瘤与免疫细胞、基质细胞的相互作用。

注意事项

无菌操作：培养基使用前需确保无菌环境，避免污染。
补充因子：根据实验需求，可能需要额外添加特定生长因子或抑制剂。
类器官状态监测：定期观察类器官的形态和生长状态，及时调整培养条件。

技术支持与售后服务

技术支持：提供详细的产品说明书、实验方案和技术支持。
售后服务：如有任何问题，可联系厂家或供应商获取帮助。

结论

肺癌类器官培养基（JFKR-LC-100/JFKR-LC-500）是一款高效、稳定的培养基，专为肺癌类器官的体外培养设计。其优化的配方和高质量的性能使其成为肺癌生物学研究、药物筛选和个性化医疗的理想选择。通过使用该培养基，研究人员能够获得高质量的肺癌类器官，推动肺癌相关研究的进展，为肺癌治疗提供新的思路和方法。

试剂盒产品信息

	产品组成	规格	储存条件及周期
1	肺癌类器官培养基A	100 mL	4 ℃， 3 months或者 -20 ℃，1 year
2	原代缓冲液B	250 mL	4/-20 ℃，2 year
3	原代组织消化液C	30 mL	4/-20 ℃，1 year
4	类器官传代消化液 D	30 mL	4/-20 ℃，1 year
5	组织保存液E	100 mL	4/-20 ℃，1 year
6	类器官冻存液 F	20 mL	4/-20 ℃，2 year
7	传代缓冲液	250 mL	4/-20 ℃，2 year
8	低因子无酚红基质胶	5ml	-20℃，1 year -80℃，长期

备注：基质胶仅试剂盒Pro版含有,以上所有成分都可单独购买。

试剂到货处理：

1. 肺癌类器官培养基A 在4 ℃可保存3个月，收到货后4 ℃保存，建议1个月内使用完毕，长期不用建议放于-20 ℃储存，避免反复冻融超过2次。

2.组织保存液E、原代组织消化液C内含有维持细胞活性营养成分，为了保持试剂营养成分的活性，长期不用建议放于-20 ℃储存，避免反复冻融超过2次。

操作步骤：

1、样本前处理

实验材料：

原代缓冲液B（4℃预冷）、组织保存液E、组织运输箱、冰袋

(1) 取样以及组织样本运输是类器官构建成功的第一个环节也是最容易忽视的步骤，若样本前期保存不当会导致细胞活性差、污染、正常细胞少等问题，降低构建成功率。

(2) 新鲜的组织样本取出后，首先用原代缓冲液B清洗3-5次，将样本表面血液冲洗干净，放入组织保存液中4℃保存运输（72h 内）。

2、类器官原代培养（以24孔板为例）

实验材料：

原代缓冲液B（4℃预冷）、原代组织消化液C（37℃）、基质胶（提前24h放入4℃冰箱融化）、肠癌类器官培养基A（室温或37℃）、镊子（10㎝）、尖头眼科手术剪、一次性60mm培养皿、1.5mL、15mL、50mL离心管、100㎛滤膜、3mL巴氏吸管/移液枪、24细胞培养板、金属冰盒

(1) 取材后的肠癌组织建议在 2 - 8℃条件下保存，快速转运至洁净实验室进行组织处理和干细胞分离，拍照并登记信息。

(2) 准备若干培养皿，加入 4℃预冷的原代缓冲液 B备用。

(3) 取样管消毒，将肠癌组织放入培养皿中，原代缓冲液 B 清洗三次后，去除杂质，眼科剪或手术刀将组织剪切成体积约为 1~3 mm3 的组织块。（建议放入1.5ml EP管剪碎组织）

(4) 剪碎后的组织块加入5ml原代组织消化液C 37℃震荡消化15-25 min（消化过程中随时观察组织消化情况）。

注：组织量太少或活检样本用 1ml 原代组织消化液 C 在 1.5ml EP 管内消化。

(5) 取少量消化液在显微镜下观察，镜下观察到较多的70μm以下的细胞簇或单个细胞后（图1-2），加入3倍体积原代缓冲液B终止消化。

胃癌类器官培养基(JFKR-CRC-100/JFKR-CRC-500)(图5)

(6) 使用100μm孔径的筛网过滤，收集滤液，于300g富集离心5min后弃去上清，添加原代缓冲液 B再次重悬，300g富集离心5min后弃去上清。（沉淀过少或无红细胞时进入步骤8）

(7) 细胞沉淀含有红细胞，弃上清，加入1-2mL红细胞裂解液1-2min后，稀释至10mL，再次离心（300g离心5min）。

(8) 基质胶计算：第6步后观察收集到的细胞沉淀体积量，添加25倍细胞沉淀体积的基质胶重悬铺板。（可借鉴图2-1，按照如图细胞沉淀量分别加200ul、150ul、100ul、50ul基质胶）

胃癌类器官培养基(JFKR-CRC-100/JFKR-CRC-500)(图6)

(9) 24孔细胞培养板为例，每孔点25-30ul组织基质胶混合物进行铺板（关键步骤：基质胶维持在0-4℃条件下操作）。

(10) 将铺好的培养板放入37℃培养箱中10-15min，基质胶凝固后，添加500-750ul肠癌类器官培养基A（恢复室温）进行培养。

3、类器官传代培养（以24孔板为例）

实验材料：（除冰盒外均需无菌）

传代缓冲液G（4℃预冷）、类器官传代消化液D（室温或37℃）、基质胶（提前一晚放入4℃冰箱融化）、肠癌类器官培养基A（室温或37℃）、15mL离心管、24孔板、冰盒

(1) 移液器吸去培养基，每孔添加1-2ml 4℃预冷传代缓冲液G放置2min。

(2) 移液枪轻柔吹打基质胶，收集于15ml离心管中，4℃静置10-15min。（每6-8孔为一组）

(3) :

3.1类器官数量不足或体积较小时： 300g离心5min弃去上清，添加1mL类器官传代培养缓冲液G重悬移入1.5ml离心管，300g离心5min弃去上清进行第4步。

3.2类器官数量较多或体积较大时：300g离心5min弃去上清，可选择机械消化或消化液消化；

1）机械消化：使用1mL枪头吹打20-30次，直至吹打至（图3-图3-1）状态时即可停止；

2）消化液消化(2-4min)：加入1-2mL类器官传代消化液D，将细胞沉淀吹散后在室温消化，在显微镜下观察，每隔一分钟吹打一次，直至消化至（图4-图4-1）状态时即可停止。添加3倍类器官消化液体积的传代缓冲液G终止消化，300g离心5min弃去上清，添加适量类器官传代培养缓冲液G重悬移入1.5ml离心管，300g离心5min弃去上清，进行第4步。

胃癌类器官培养基(JFKR-CRC-100/JFKR-CRC-500)(图7)