鼠正常肝类器官培养基（JFKR-MNH -100/JFKR-MNH -500）
鼠正常肝类器官培养基（JFKR-MNH-100/JFKR-MNH-500）是一种专为小鼠正常肝类器官（Liver Organoids）体外培养设计的高效培养基。该培养基经过优化，能够支持肝类器官的生长、增殖和功能维持，适用于肝发育、疾病模型、药物筛选及再生医学等领域的研究。
鼠正常肝类器官培养基（JFKR-MNH-100/JFKR-MNH-500）是一种专为小鼠正常肝类器官（Liver Organoids）体外培养设计的高效培养基。该培养基经过优化，能够支持肝类器官的生长、增殖和功能维持，适用于肝发育、疾病模型、药物筛选及再生医学等领域的研究。
1. 产品概述
鼠正常肝类器官培养基（JFKR-MNH-100/JFKR-MNH-500）是一种专为小鼠正常肝类器官（Liver Organoids）体外培养设计的高效培养基。该培养基经过优化，能够支持肝类器官的生长、增殖和功能维持，适用于肝发育、疾病模型、药物筛选及再生医学等领域的研究。
2. 产品特点
高效支持生长：提供肝类器官生长所需的营养因子和信号分子，促进细胞增殖和类器官形成。
功能维持：维持肝类器官的形态和功能特性，如肝细胞极性、代谢功能和分泌能力。
稳定性高：批次间一致性高，确保实验结果的可靠性和可重复性。
无血清配方：减少外源性干扰，降低背景信号，适用于高灵敏度实验。
多种规格：提供100 mL（JFKR-MNH-100）和500 mL（JFKR-MNH-500）两种规格，满足不同实验需求。
3. 适用范围
肝类器官培养：支持小鼠正常肝类器官的长期培养和扩增。
疾病模型构建：用于肝纤维化、脂肪肝、肝癌等疾病模型的建立和研究。
药物筛选：评估药物对肝类器官的毒性、代谢和疗效。
再生医学研究：研究肝类器官在肝损伤修复和再生中的应用。
4. 使用方法
培养基准备：将JFKR-MNH培养基恢复至室温，按需添加补充因子（如生长因子或抗生素）。
类器官接种：将分离或冻存的肝类器官接种于基质胶（如Matrigel）中，加入培养基。
培养条件：置于37℃、5% CO₂的培养箱中培养，定期更换培养基。
类器官传代：根据生长情况，定期进行类器官传代和扩增。
5. 储存与稳定性
储存条件：2-8℃避光保存，避免反复冻融。
有效期：未开封条件下，有效期为12个月；开封后建议尽快使用。
6. 注意事项
无菌操作：培养基使用前需确保无菌环境，避免污染。
补充因子：根据实验需求，可能需要额外添加特定生长因子或抑制剂。
类器官状态监测：定期观察类器官的形态和生长状态，及时调整培养条件。
7. 技术支持与售后服务
技术支持：提供详细的产品说明书、实验方案和技术支持。
售后服务：如有任何问题，可联系厂家或供应商获取帮助。
8.结论
鼠正常肝类器官培养基（JFKR-MNH-100/JFKR-MNH-500）是一款高效、稳定的培养基，专为小鼠肝类器官的体外培养设计。其优化的配方和高质量的性能使其成为肝发育、疾病模型、药物筛选和再生医学研究的理想选择。通过使用该培养基，研究人员能够获得高质量的肝类器官，推动相关领域的科学研究进展。
9.试剂到货处理：
1. 鼠正常肝类器官培养基A 在4 ℃可保存3个月，收到货后4 ℃保存，建议1个月内使用完毕，长期不用建议放于-20 ℃储存，避免反复冻融超过2次。
2.组织保存液E、原代组织消化液C内含有维持细胞活性营养成分，为了保持试剂营养成分的活性，长期不用建议放于-20 ℃储存，避免反复冻融超过2次。
10.操作步骤与方法：
1 组织前处理
1.1 实验材料
需提前准备原代缓冲液B（4 ℃预冷）、组织保存液E、取样管、组织运输箱、冰袋。
1.2 组织的获取与运输
组织的取样与运输是类器官构建成功的第一个环节也是最容易忽视的环节，若组织前期保存不当会导致细胞活性差、污染、正常细胞少等问题，降低类器官构建成功率。
组织应在离体的30 min内放入组织保存液E，原代缓冲液B清洗3-5次，将组织表面血液冲洗干净，放入组织保存液E中，取样管于4 ℃低温保存运输（72 h内）。
2 类器官原代培养（以24孔板为例）
2.1 实验材料
需提前准备原代缓冲液B（4 ℃）、原代组织消化液C（37 ℃）、基质胶（提前24 h放入4 ℃冰箱融化）、 鼠正常肝类器官培养基A（室温或37 ℃）、镊子（10㎝）、尖头眼科手术剪/手术刀片、一次性60 mm培养皿、1.5 mL/15 mL/50 mL离心管、100㎛细胞滤网、3 mL巴氏吸管/1000 uL移液枪、24孔细胞培养板、金属冰盒。
2.2 鼠正常肝类器官构建
2.2.1 组织的处理
取材后的鼠正常肝组织建议在 2 – 8 ℃条件下保存运输，快速转运至洁净实验室进行 鼠正常肝类器官构建实验流程，组织拍照并登记详细信息。
2.2.1.1 组织的清洗
取样管消毒后，在超净台中将组织取出来，放入培养皿中，加入原代缓冲液 B，用3 mL巴氏吸管或1000 uL移液枪吹打清洗，重复清洗操作三次及以上。
2.2.1.2 组织的解离与消化
用眼科剪或手术刀片去除组织杂质，镊子转移至1.5 mL EP管中，用眼科剪进一步将组织机械解离成体积约为 1~3 mm3的组织块，转移至15 mL EP管中，加入5 mL原代组织消化液37 ℃震荡消化15-25 min。消化过程每10 min显微镜下观察组织消化情况，取少量消化液在显微镜下观察，观察到较多的70 μm以下的细胞簇或单个细胞后进行下一步操作。组
织消化程度见图1。
图一 组织消化成较多细胞簇或较多单细胞
2.2.1.3 组织的过滤
消化完成组织通过100 μm孔径的细胞筛网过滤，收集滤液，加入3倍体积的原代缓冲液B漂洗终止消化，300 g富集离心5 min后弃上清；若细胞沉淀含有红细胞，加入1-2 mL红细胞裂解液1-2 min后，稀释至10 mL，300 g富集离心5 min后弃上清。
2.2.1.4 类器官培养
观察离心收集的细胞沉淀体积量，添加25倍体积的基质胶重悬，形成3D培养空间结构，重悬过程中避免产生气泡。细胞沉淀体积量见图2，按照如图细胞沉淀量分别加入300 μL、250μL、150 μL、100 μL基质胶。
图二 细胞沉淀体积量
24孔细胞培养板按照25 uL-30 uL/孔点胶，基质胶全程维持在0-4 ℃条件下操作。细胞培养板放置37 ℃培养箱中10-15 min，待基质胶凝固后，每孔添加500-750 uL 鼠正常肝类器官培养基A（提前37 ℃预热）进行培养。
3 类器官传代培养（以24孔板为例）
3.1 实验材料
传代缓冲液G（4 ℃）、类器官传代消化液D（室温或37 ℃）、基质胶（提前24 h放入4 ℃冰箱融化）、 鼠正常肝类器官培养基A（室温或37 ℃）、1.5 mL/15 mL离心管、24孔细胞培养板、冰盒。
3.2 类器官传代
选择合适的类器官进行传代，一般为生长一周左右，显微镜10X下可看到超过20个的类器官，或大小100-200㎛的类器官。
吸掉培养基，每孔添加等体积的传代缓冲液G，移液枪轻柔吹散基质胶，收集于15 mL离心管中，每6-8孔转移至一个离心管，4 ℃静置10-15 min。
3.2.1 类器官消化
根据类器官的生长情况来决定是否需要消化传代。离心后若管底沉淀少、未见细胞、基质胶未分层等情况，可再次重悬，提高离心力，再次离心。
当类器官数量不足或体积较小时，300 g离心5 min弃上清弃。
当类器官数量较多或体积较大时，300 g离心5 min弃上清，可选择消化液消化或机械消化。
消化液消化：加入1-2 mL类器官传代消化液D，将细胞沉淀吹散后，室温消化2-4 min，每隔一分钟吹打一次，显微镜下观察，直至消化至（图A-B）状态时即可停止。添加3倍类器官消化液体积的传代缓冲液G终止消化，300 g离心5 min弃。
图三 类器官传代消化程度图
3.2.2 传代类器官培养
观察离心收集的类器官沉淀体积量，若沉淀很少可预留1倍沉淀体积的上清液点胶，沉淀很多上清可吸净，添加25倍类器官沉淀体积的基质胶量重悬类器官。基质胶体积量可参考“类器官原代培养操作图二”。
24孔细胞培养板按照25 uL-30 uL/孔点胶，基质胶全程维持在0-4 ℃条件下操作。细胞培养板放置37 ℃培养箱中10-15 min，待基质胶凝固后，每孔添加500-750 uL 鼠正常肝类器官培养基A（提前37 ℃预热）进行培养。
4 类器官冻存（以24孔板为例）
4.1 实验材料
传代缓冲液G（4 ℃）、类器官冻存液F（4 ℃）、15 mL离心管、细胞冻存管、程序降温盒、移液枪。
4.2 类器官冻存
暂不使用的类器官应冻存，放于低温环境保存。
吸掉培养基，每孔添加等体积的传代缓冲液G，移液枪轻柔吹散基质胶，收集于15 mL离心管中，每6-8孔转移至一个离心管，4 ℃静置10-15 min。300 g离心5 min弃上清，每三个孔加入2 mL类器官冻存液F，轻柔吹打混匀，转至细胞冻存管中，每管1 mL。
做好标记信息，放入程序降温盒中，移至-80 ℃冰箱中，48 h后，放入液氮罐中保存。或放入4 ℃冰箱40 min后，放入-20 ℃冰箱中2 h，移至-80 ℃冰箱中，48 h后，放入液氮罐中保存。
5 类器官复苏培养（以24孔板为例）
5.1 实验材料
传代缓冲液G、 鼠正常肝类器官培养基A、基质胶（提前24 h放入4 ℃冰箱融化）、24孔细胞培养板、冰盒、15mL离心管、水浴锅、3mL巴氏吸管/移液枪。
5.2 类器官复苏培养
从低温环境中取出冻存的类器官，快速置于37 ℃水浴锅中融解，水浴融解过程中，需轻轻摇动冻存管，以确保冻存液在短时间内完全融解。将解冻后的类器官快速转移至15 mL离心管，使用移液枪轻柔吹打6-8次，300 g 离心5 min弃上清；添加适量传代缓冲液G重悬，移入1.5 mL离心管300 g离心5 min，弃上清。
按每管冻存管添加200 uL基质胶重悬，24孔细胞培养板按照25 uL-30 uL/孔点胶，基质胶全程维持在0-4 ℃条件下操作。细胞培养板放置37 ℃培养箱中10-15 min，待基质胶凝固后，每孔添加500-750 uL 鼠正常肝类器官培养基A（提前37 ℃预热）进行培养。
6 基质胶使用
在2–8 ℃环境条件下，基质胶过夜解冻。当使用基质胶时，请将其放在冰盒以防止过早凝固。基质胶在37 ℃下20分钟内形成凝胶。
6.1 基质胶特点：
Ø 4 ℃连续14天仍可保持较好的流动性
Ø 放入37 ℃培养箱中10-15 min即可凝固
Ø 培养过程中不易破损，去胶干净不粘培养板
运用范围:
FOR LABORATORY RESEARCH USE ONLY. NOT FOR USE IN DIAGNOSTIC PROCEDURES.
