单标信号放大试剂盒Plus版（TYR620/兔鼠通用二抗）

一、产品概述 

本产品为基于酪酰胺信号放大（TSA）技术开发的Plus版高灵敏度免疫荧光检测试剂盒，采用TYR-620浓缩型荧光染料搭配专属TSA反应缓冲液，配套HRP山羊抗兔/鼠通用二抗，通过HRP介导的酶促共价沉积反应，可实现靶蛋白检测信号10-100倍增强。试剂盒支持单标免疫荧光高灵敏检测，也可通过热修复洗脱循环开展双标、三标及更高重数的多重免疫荧光实验；兔鼠通用二抗可同时兼容兔源与鼠源一抗，突破传统多重染色的抗体种属匹配限制，大幅简化实验设计。产品配套从样本封闭、靶标染色到封片成像的全套即用型试剂，适配石蜡切片、冰冻切片、细胞爬片、类器官等多种样本类型，广泛应用于肿瘤病理研究、组织微环境分析、低丰度蛋白原位检测、免疫机制研究等科研与临床前实验场景。

二、检测原理

酪酰胺信号放大（TSA）是一类依托辣根过氧化物酶（HRP）介导的酶学原位标记技术，原理与常规免疫组化DAB显色方法同源。实验过程中，HRP标记的二抗与结合在靶抗原上的一抗结合，随后加入酪胺荧光素底物，HRP在过氧化氢环境下催化底物活化，生成的活性荧光基团可与抗原周边蛋白的酪氨酸、色氨酸、组氨酸残基发生共价结合，使荧光分子稳定锚定在靶标位点，在抗原-抗体结合区域形成大量荧光素沉积，最终实现检测信号10-100倍的增强效果。 完成单轮靶标染色后，可通过热修复法或抗体洗脱液洗去除非共价结合的一抗-二抗-HRP复合物，而共价结合的荧光信号可稳定保留在组织样本上；随后更换下一靶标的一抗与对应光谱的酪胺荧光底物，重复孵育与显色流程，即可实现多靶标连续标记。由于每轮反应体系中仅存在单一抗体，因此不存在抗体交叉反应问题，也无需考虑一抗与二抗的种属匹配限制；同一张切片上的所有靶标均可选用高特异性兔单克隆抗体，搭配同一支HRP抗兔二抗即可完成全部实验。本系列试剂盒涵盖TYR-480、TYR-520、TYR-570、TYR-620、TYR-690、TYR-780等多种光谱的酪胺荧光染料，各染料可单独使用也可自由组合，实现单标、双标、三标乃至更多重的荧光放大检测与多重同源抗体荧光标记。

三、产品应用

1. 低丰度靶蛋白高灵敏免疫荧光检测，解决常规免疫荧光中弱表达蛋白信号弱、背景高、检出率低的问题

2. 多重免疫荧光实验，支持同源抗体或兔鼠混合一抗的多轮循环染色，用于肿瘤微环境、免疫细胞亚群、细胞空间分布图谱分析

3. 肿瘤病理研究，包括胃癌、肠癌、肺癌、肝癌等各类肿瘤组织的多标志物原位表达与共定位分析

4. 基础医学与免疫研究，涵盖炎症疾病、纤维化病变、神经科学、器官损伤修复等方向的病理机制研究

5. 类器官与细胞生物学实验，用于类器官切片、细胞爬片的多靶标荧光标记、药物筛选与药效评估

四、产品特点

1. 浓缩型Plus染料，性价比优异：TYR-620Plus为200倍浓缩型荧光染料，可根据实验需求灵活调整稀释比例，适配不同抗原表达强度的样本，有效降低实验成本

2. 专属反应缓冲液，结果稳定可靠：配套专用TSA buffer，优化反应体系pH值与离子强度，保障HRP酶促反应效率稳定，批次间实验重复性好

3. 兔鼠通用二抗，选型灵活便捷：HRP山羊抗兔/鼠通用二抗可同时识别兔源、鼠源一抗，一抗选择范围更广，无需单独配置不同种属二抗

4. 信号放大倍数高，检测灵敏度强：酶促沉积反应可实现10-100倍的信号增强，可清晰检出常规荧光方法无法识别的低丰度靶蛋白

5. 荧光共价结合，信号稳定耐洗脱：酪胺荧光分子与组织蛋白共价结合，耐高温洗脱与多轮循环，多重染色过程中信号不丢失、不串色

6. 全套试剂配齐，开箱即可使用：试剂盒包含浓缩荧光染料、TSA缓冲液、HRP通用二抗、DAPI染液、抗体稀释液、3%过氧化氢、干固型抗荧光淬灭封片剂，无需额外采购配套试剂

7. 干固型封片剂，保存效果更佳：配套干固型抗荧光淬灭封片剂，封片后切片无流动、不易脏污，长期保存荧光不易淬灭

8. 多色拓展性强：可与TYR系列其他Plus荧光染料自由搭配，轻松实现2-7重超多重免疫荧光染色，满足复杂实验需求

五、试剂盒组分

六、染料使用说明 

TSA荧光染料反应液由TYR-xxxPlus荧光染料与TSA buffer配制而成，推荐标准稀释比例为TYR-xxxPlus荧光染料:TSA buffer=1:200，该比例在大多数实验条件下可获得最佳信噪比。 染料稀释比例可根据具体实验情况灵活调整优化，最佳适用范围为1:50至1:400。一般建议：若一抗孵育时间为常温1h-3h，推荐稀释比例为1:50-1:200；若一抗孵育条件为4度过夜（12h或以上），推荐稀释比例为1:200-1:400或更高。

七、试剂盒使用简要流程

1. 样本前处理：石蜡切片脱蜡水化或冰冻切片复温，进行抗原修复处理

2. 内源酶封闭：使用3%过氧化氢孵育样本，封闭组织内源性过氧化物酶

3. 封闭与一抗孵育：使用抗体稀释液封闭样本非特异性结合位点，随后加入靶标一抗进行孵育

4. 二抗孵育：滴加HRP山羊抗兔/鼠通用二抗，室温避光孵育

5. TSA荧光显色：按比例配制TYR-620Plus荧光染料工作液，滴加至样本上进行显色反应

6. 多重染色循环：如需多靶标染色，进行热修复洗脱非共价结合的抗体复合物，更换下一靶标一抗与对应荧光底物，重复上述孵育与显色步骤

7. 核染色与封片：使用DAPI染液进行细胞核复染，滴加干固型抗荧光淬灭封片剂封片，使用荧光显微镜或共聚焦显微镜成像观察 详细操作步骤请参见配套技术文档《多重免疫荧光实验流程》

八、产品成像示例 

（A）人输卵管组织：指标A（570黄）＋指标B（520绿）＋指标C（690粉） 

（B）小鼠肾组织：指标A（570黄）＋指标B（520绿）＋指标C（690粉）

（C）人胃癌肿瘤组织：指标A（690粉）＋指标B（620红）＋指标C（570黄）＋指标D（520绿）

（D）人肠组织：指标A (570黄)＋指标B (520绿) ＋指标C(690粉) ＋指标D(620红) ＋指标E(480青)